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BUNSEN本生:ELISA實驗雙抗夾心法的原理和操作步驟
更新時間:2026-08-24瀏覽:280次

  BUNSEN本生:ELISA實驗雙抗夾心法的原理和操作步驟


  BUNSEN本生適配的ELISA雙抗夾心法是檢測樣本中特定抗原的主流高靈敏度方法,核心原理是讓待測抗原被兩個不同表位的抗體“夾心"捕獲,最終通過酶促反應輸出可量化的信號。

  一、原理

  雙抗體夾心機制?:包被在酶標板上的捕獲抗體,先結合樣本中的待測抗原,隨后加入的酶標檢測抗體結合抗原的另一個獨立表位,形成“捕獲抗體-抗原-酶標抗體"的三元夾心復合物。

  信號放大邏輯?:復合物上標記的酶可催化底物發(fā)生顯色/熒光反應,少量酶分子就能生成大量信號分子,檢測靈敏度比直接/間接ELISA高2~5倍。

  適用前提?:待測抗原必須至少擁有2個可被抗體識別的抗原表位,單表位小分子抗原無法使用該方法檢測。

  二、標準操作步驟

  包被捕獲抗體?:將捕獲抗體稀釋至工作濃度,加入96孔酶標板,4℃孵育過夜,讓抗體充分吸附在板孔底部。

  封閉非特異性位點?:棄去孔內液體,加入封閉液(如1%BSA溶液),室溫封閉1~2小時,阻斷板孔上未結合抗體的空白位點,避免后續(xù)非特異性吸附。

  加入待測樣本?:棄去封閉液,洗滌板孔3次后,加入梯度稀釋的標準品和待測樣本,室溫孵育1~2小時,讓抗原與捕獲抗體充分結合。

  加入酶標檢測抗體?:棄去樣本液,充分洗板去除未結合的游離物質,加入酶標記的檢測抗體,室溫孵育1小時,完成夾心復合物組裝。

  洗板除雜?:再次洗板3~5次,清除所有未結合的多余抗體,避免背景信號過高。

  底物顯色反應?:加入對應酶的顯色底物,室溫避光反應10~30分鐘,酶會催化底物生成有色產(chǎn)物或熒光信號。

  終止與讀數(shù)?:按要求加入終止液終止反應,使用酶標儀在對應波長下讀取吸光度值,通過標準品曲線換算得到樣本中抗原的精準濃度。

  三、BUNSEN本生配套耗材適配要點

  推薦使用本生高結合力酶標板,可提升捕獲抗體的包被效率,降低非特異性背景。

  搭配本生專用光學透明封板膜,孵育過程中密封板孔,避免液體蒸發(fā)和交叉污染,保障孔間結果一致性。

  本生系列洗板機可實現(xiàn)自動化精準洗板,大幅降低人工操作誤差,提升實驗重復性。

  注:以上資料僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

  本生BUNSEN科研耗材適應客戶:醫(yī)院檢驗科PCR實驗室,中心實驗室,肝病中心;第三方檢測機構,科研院所,大專院校,制藥廠,試劑生產(chǎn)廠家,疾控中心,檢驗檢疫。

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